簡介

盡（jìn）管存在解（jiě）剖和（hé）生理上（shàng）的差異，小（xiǎo）鼠在研究人類肺部疾病，包括急性肺損傷（ALI）和肺纖維（wéi）化方麵仍具（jù）有極（jí）高的價值。治療方法（fǎ）是諸多肺部疾（jí）病研究的核心，其中口咽吸入法（OPA）已被廣泛用（yòng），但其缺點是部分藥劑可能被吞入胃腸道，從而導致（zhì）給藥劑量（liàng）的不準確；另一種是經氣管給（gěi）藥，這涉及（jí）到在深（shēn）度麻醉狀態下切開氣管直接將藥物注入到呼吸道，然而，這種操作（zuò）不僅因其侵入性（xìng）和（hé）造成呼吸（xī）道損傷而不可取，還存在耗時過長，且操作者需要（yào）大量的訓（xùn）練等問題。

1999年，Brown等人發表研究論文描述了（le）一種小鼠肺部直接插管的方法，後續也有其他幾篇論文描述了不（bú）同的小鼠肺部插管方法，但這種插管的主要問題是：當插（chā）管導管（guǎn）接近氣管並（bìng）準備插入時，導管本身會阻擋光（guāng）線，從而無法（fǎ）看清需要插入的位置。

本文展示了如何簡單、低成本（běn）地消除這個可視化問題，從而確保在相對少（shǎo）的培訓或經驗下成（chéng）功進行插管。

方法

準備：

1、導管。對於20-35 g小鼠（shǔ）的插管，我們使用1或1.5英寸長，20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每隻小鼠使用新的無菌導管，但導管也可以在消毒後用70%乙（yǐ）醇浸泡（pào）過夜重複使用。盡管小鼠的咽（yān）部和氣管不是無菌的，但應遵循（xún）適當的清潔程序，包括使（shǐ）用無菌手套和（hé）器械。

2、光纖電纜。我們使用約70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光纜，但長度不是決定性（xìng）的因素。重要的是要確（què）保纖維的邊（biān）緣是平滑（huá）的，因為在用剃刀切割電纜後，邊緣相對較銳利，很（hěn）容易刺穿氣管壁。然而隻需（xū）將（jiāng）光纖端（duān）部（bù）放在1000粒度的砂紙上，就可以非常容易地打磨平（píng）這個邊緣。另一端插入橡膠塞（sāi）中。最簡便的方法是先用18號針通過橡膠塞，插入光纖通過針孔，然後撤出針。橡膠（jiāo）塞連接150瓦鹵素光源。重（chóng）要的是（shì）要確保使（shǐ）用矽（guī）膠橡（xiàng）膠（jiāo）塞（sāi）(或其他耐熱材料)，因為普通橡（xiàng）膠或軟木在靠近熱光源時可能會燃燒。

插管：

1、參見圖1和2。通過一段短矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖（xiān）電纜（lǎn）。將這個橡膠管係緊，同時（shí）仍然允許調整光纖電纜。將矽膠管緊密地插入套管的（de）魯爾端（duān），固定光纖電纜（lǎn）在套管內的位置。調整光纖電（diàn）纜的位置，使其在套（tào）管尖端前方（fāng）約（yuē）4毫米處穿過套管（guǎn）。

圖（tú）1.如（rú）圖所示，光纜插入矽橡膠塞（sāi）中，與其相對的另一端緊綁著一小段矽橡膠管。

圖2.圖（tú）片展示了橡膠塞與（yǔ）光源的連接（jiē），光纖的另一端穿過插管導（dǎo）管。左側還展示了一個（gè）簡單的支架，用於在（zài）插管過程中固定小（xiǎo）鼠。

2、將麻醉後的小鼠放置（zhì）在垂直（zhí）支架上，由其上（shàng）切牙懸（xuán）掛(圖3)。大多數研究者發現，當小鼠的腹側麵向自（zì）己時，視（shì）覺效果最佳。非常輕柔地拔出舌頭，用拇指和食指握住（zhù）。中指放在頸部和塑料支架之間。利用食指和拇（mǔ）指對舌頭的牽引（yǐn）開啟口腔，並用頸部後（hòu）方的中指調（diào）整頭部的角度，使（shǐ）插管路徑伸直，如圖3所示。

圖3.兩個視（shì）角展（zhǎn）示（shì）了準備插管的小鼠位置

3、使用光（guāng）纖電纜作（zuò）為光源和導入器（qì），推動（dòng）它通過可視化聲帶。如果看不到聲帶，可以通過中指作為支點，輕輕（qīng）用力拉舌頭。插入後（hòu），將套管再（zài）向前（qián）推進約5 mm。然後，小心不要移動套管，拔出光纖（xiān）電纜。將小鼠平躺下來，用膠（jiāo）帶固（gù）定導管，並用橡皮泥(塑（sù）型黏土)支（zhī）撐導管接頭，如圖4所示。

圖4。此圖展示了一隻（zhī）準備通氣的已插管小鼠。圍繞（rào）嘴部（bù）的膠帶有助於防止導管移動。一（yī）小（xiǎo）塊（kuài）橡皮泥(建模黏土)提供了一個便利的支撐點，用於固定導管接頭與呼吸機的連接。

4、步驟3中（zhōng）的操作不容易演（yǎn）示或教學，因為這是一個單獨的（de）操作。然（rán）而，通過對舌頭的牽引力和頭部後麵的（de）支撐的微（wēi）妙調（diào）整，幾乎所有嚐試這種方法的人都會很快找到正確的方式來調整小（xiǎo）鼠的位置，使（shǐ）聲帶可（kě）視化。

總結

本文描述的（de）方（fāng）法有幾個優點。首先，裝置簡單且價格低廉。製作裝置不需要任何特（tè）殊工具或昂貴的設備。在實踐中，對於從未嚐試（shì）過插管的研究員、學生和技術人員來說更容易掌握。

在進行插管時，有幾個實際問題需要提及。在最初打開小（xiǎo）鼠口腔時（shí），盡量輕柔拉舌頭非常重要。如果（guǒ）使用（yòng）無保護（hù）鉗，很容易損傷（shāng）舌頭，這可能（néng）導致小鼠死亡。在首次學習如何插管時（shí），最重要的是使用頸部後方的手指來（lái）調整（zhěng）頭部角度，以使氣管開（kāi）口的可視（shì）化。如果操作正確，對舌頭進（jìn）行足（zú）夠的（de）牽拉，很容易看到聲帶。最初的可（kě）視化步驟通（tōng）常需要最多的時間，因為一旦看到氣管開口，插入纖維電纜和靜脈導管就相對簡單了。

總之（zhī），本文描述的插管方法製作成（chéng）本低，使用（yòng）簡（jiǎn）單，可以令大多數研究人（rén）員和實驗室（shì）技術人員在相對較少（shǎo）的經（jīng）驗下快速掌握小鼠插（chā）管技（jì）術。