
小鼠肺部插(chā)管(guǎn)簡易(yì)方法
簡介
盡(jìn)管存在解(jiě)剖和(hé)生理上(shàng)的差異,小(xiǎo)鼠在研究人類肺部疾病,包括急性肺損傷(ALI)和肺纖維(wéi)化方麵仍具(jù)有極(jí)高的價值。治療方法(fǎ)是諸多肺部疾(jí)病研究的核心,其中口咽吸入法(OPA)已被廣泛用(yòng),但其缺點是部分藥劑可能被吞入胃腸道,從而導致(zhì)給藥劑量(liàng)的不準確;另一種是經氣管給(gěi)藥,這涉及(jí)到在深(shēn)度麻醉狀態下切開氣管直接將藥物注入到呼吸道,然而,這種操作(zuò)不僅因其侵入性(xìng)和(hé)造成呼吸(xī)道損傷而不可取,還存在耗時過長,且操作者需要(yào)大量的訓(xùn)練等問題。
1999年,Brown等人發表研究論文描述了(le)一種小鼠肺部直接插管的方法,後續也有其他幾篇論文描述了不(bú)同的小鼠肺部插管方法,但這種插管的主要問題是:當插(chā)管導管(guǎn)接近氣管並(bìng)準備插入時,導管本身會阻擋光(guāng)線,從而無法(fǎ)看清需要插入的位置。
本文展示了如何簡單、低成本(běn)地消除這個可視化問題,從而確保在相對少(shǎo)的培訓或經驗下成(chéng)功進行插管。
方法
準備:
1、導管。對於20-35 g小鼠(shǔ)的插管,我們使用1或1.5英寸長,20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每隻小鼠使用新的無菌導管,但導管也可以在消毒後用70%乙(yǐ)醇浸泡(pào)過夜重複使用。盡管小鼠的咽(yān)部和氣管不是無菌的,但應遵循(xún)適當的清潔程序,包括使(shǐ)用無菌手套和(hé)器械。
2、光纖電纜。我們使用約70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光纜,但長度不是決定性(xìng)的因素。重要的是要確(què)保纖維的邊(biān)緣是平滑(huá)的,因為在用剃刀切割電纜後,邊緣相對較銳利,很(hěn)容易刺穿氣管壁。然而隻需(xū)將(jiāng)光纖端(duān)部(bù)放在1000粒度的砂紙上,就可以非常容易地打磨平(píng)這個邊緣。另一端插入橡膠塞(sāi)中。最簡便的方法是先用18號針通過橡膠塞,插入光纖通過針孔,然後撤出針。橡膠(jiāo)塞連接150瓦鹵素光源。重(chóng)要的是(shì)要確保使(shǐ)用矽(guī)膠橡(xiàng)膠(jiāo)塞(sāi)(或其他耐熱材料),因為普通橡(xiàng)膠或軟木在靠近熱光源時可能會燃燒。
插管:
1、參見圖1和2。通過一段短矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖(xiān)電纜(lǎn)。將這個橡膠管係緊,同時(shí)仍然允許調整光纖電纜。將矽膠管緊密地插入套管的(de)魯爾端(duān),固定光纖電纜(lǎn)在套管內的位置。調整光纖電(diàn)纜的位置,使其在套(tào)管尖端前方(fāng)約(yuē)4毫米處穿過套管(guǎn)。
圖(tú)1.如(rú)圖所示,光纜插入矽橡膠塞(sāi)中,與其相對的另一端緊綁著一小段矽橡膠管。
圖2.圖(tú)片展示了橡膠塞與(yǔ)光源的連接(jiē),光纖的另一端穿過插管導(dǎo)管。左側還展示了一個(gè)簡單的支架,用於在(zài)插管過程中固定小(xiǎo)鼠。
2、將麻醉後的小鼠放置(zhì)在垂直(zhí)支架上,由其上(shàng)切牙懸(xuán)掛(圖3)。大多數研究者發現,當小鼠的腹側麵向自(zì)己時,視(shì)覺效果最佳。非常輕柔地拔出舌頭,用拇指和食指握住(zhù)。中指放在頸部和塑料支架之間。利用食指和拇(mǔ)指對舌頭的牽引(yǐn)開啟口腔,並用頸部後(hòu)方的中指調(diào)整頭部的角度,使(shǐ)插管路徑伸直,如圖3所示。
圖3.兩個視(shì)角展(zhǎn)示(shì)了準備插管的小鼠位置
3、使用光(guāng)纖電纜作(zuò)為光源和導入器(qì),推動(dòng)它通過可視化聲帶。如果看不到聲帶,可以通過中指作為支點,輕輕(qīng)用力拉舌頭。插入後(hòu),將套管再(zài)向前(qián)推進約5 mm。然後,小心不要移動套管,拔出光纖(xiān)電纜。將小鼠平躺下來,用膠(jiāo)帶固(gù)定導管,並用橡皮泥(塑(sù)型黏土)支(zhī)撐導管接頭,如圖4所示。
圖4。此圖展示了一隻(zhī)準備通氣的已插管小鼠。圍繞(rào)嘴部(bù)的膠帶有助於防止導管移動。一(yī)小(xiǎo)塊(kuài)橡皮泥(建模黏土)提供了一個便利的支撐點,用於固定導管接頭與呼吸機的連接。
4、步驟3中(zhōng)的操作不容易演(yǎn)示或教學,因為這是一個單獨的(de)操作。然(rán)而,通過對舌頭的牽引力和頭部後麵的(de)支撐的微(wēi)妙調(diào)整,幾乎所有嚐試這種方法的人都會很快找到正確的方式來調整小(xiǎo)鼠的位置,使(shǐ)聲帶可(kě)視化。
總結
本文描述的(de)方(fāng)法有幾個優點。首先,裝置簡單且價格低廉。製作裝置不需要任何特(tè)殊工具或昂貴的設備。在實踐中,對於從未嚐試(shì)過插管的研究員、學生和技術人員來說更容易掌握。
在進行插管時,有幾個實際問題需要提及。在最初打開小(xiǎo)鼠口腔時(shí),盡量輕柔拉舌頭非常重要。如果(guǒ)使用(yòng)無保護(hù)鉗,很容易損傷(shāng)舌頭,這可能(néng)導致小鼠死亡。在首次學習如何插管時(shí),最重要的是使用頸部後方的手指來(lái)調整(zhěng)頭部角度,以使氣管開(kāi)口的可視(shì)化。如果操作正確,對舌頭進(jìn)行足(zú)夠的(de)牽拉,很容易看到聲帶。最初的可(kě)視化步驟通(tōng)常需要最多的時間,因為一旦看到氣管開口,插入纖維電纜和靜脈導管就相對簡單了。
總之(zhī),本文描述的插管方法製作成(chéng)本低,使用(yòng)簡(jiǎn)單,可以令大多數研究人(rén)員和實驗室(shì)技術人員在相對較少(shǎo)的經(jīng)驗下快速掌握小鼠插(chā)管技(jì)術。