犬骨髓穿刺（cì）抽吸技術
骨髓穿刺（cì）抽吸技術
骨髓穿（chuān）刺抽（chōu）吸技術的早期發展主要集中在人類醫學領域（yù），隨後（hòu）逐漸應用於動（dòng）物研究。最初的技（jì）術較為簡單，主要用於獲取骨髓樣本以進行血液學和病理學分析（xī）。隨（suí）著研究需求的增加，骨髓穿刺抽（chōu）吸的技術逐漸得到了改（gǎi）進和（hé）優化，設（shè）備改進方麵（miàn）引（yǐn）入了專用（yòng）的骨髓穿刺針（zhēn），這些穿刺針具備更（gèng）好的設計可以減少組織損傷和提高樣本質量（liàng），以及（jí）在操作過程中（zhōng）引（yǐn）入（rù）嚴格的無菌技術以減少感染的風險。
骨（gǔ）髓穿刺技術不僅在（zài）醫學研究中得到廣泛應用還擴展到多個領域。藥物研發，評估新藥對骨髓的影響，尤其是抗癌（ái）藥和免疫抑製藥物的研究中；毒理學研究中（zhōng），同（tóng）樣需要研究有毒物質對骨髓的影響；此外（wài），基因治療，通過獲取（qǔ）骨髓細胞進行基因組研究和基因編（biān）輯實驗等都（dōu）需要進行骨髓（suǐ）穿刺。本文將介紹實驗犬的骨（gǔ）髓（suǐ）穿刺抽吸技術。
采集部位
對於犬，骨髓樣（yàng）本通常從股骨轉子窩、肱（gōng）骨近（jìn）端或髂骨翼采集，其他部位（wèi）包括胸骨、肋骨。如果骨盆和股骨區域含有豐富的脂肪組（zǔ）織，采集則會變得（dé）更具挑戰性。下文主要講述犬肱骨近端骨（gǔ）髓采集的操（cāo）作程序。
肱骨近端骨髓采集
材料和設備
○ 無（wú）菌手套
○ 電動剪毛器和清（qīng）潔溶液
○ 局部麻醉藥（如利多卡因、布比卡因）
○ 含有2.5% - 3%乙二胺（àn）四乙酸溶液（EDTA約2 mL）的培養皿
○ 玻璃顯微鏡（jìng）載玻片
○ 顯微血細胞比容毛細血管（圖A），有毛（máo）細血管球
○ 11號手術刀片
○ 無（wú）菌紗布
○ 10或12ml注射器
○ 14G至18G帶針芯（xīn）的（de）骨髓針（圖B和C）
A：骨髓穿刺所需的材（cái）料和設備
B：帶蓋和針芯的穿刺針
C：已移除蓋和（hé）針芯的穿刺針
操作步驟
1、在進行深度（dù）鎮（zhèn）靜或（huò）全身麻醉後，動物側臥位（wèi），修剪采集部位的毛發，可以在采集部位皮下（xià）注射局部麻醉劑（jì）（如利多卡（kǎ）因、布比卡因），采集部位無菌清洗。如圖1A。
圖1A：動物側臥位，采集部位的毛發已剔除。
2、打開並佩戴無菌手套。助理輔助將穿刺針、注射器和手術刀片打開（kāi）並放入無（wú）菌區域，或將這（zhè）些物品以無（wú）菌的（de）方式遞給術者。使用10或12ml的注射器，在保持無菌的情況下，抽取約1ml的EDTA溶（róng）液（yè）。如圖1B 。
圖1B：從培養皿中抽取EDTA溶液
3、將注射器放置在無菌區域內。移除穿刺針的蓋子和（hé）針芯，通過順時針旋轉確保針頭的防護裝置牢固地連接在針頭的基部（bù）。將含有EDTA的注射器連（lián）接到針頭的頂部（bù）並旋緊。通過將EDTA噴（pēn）回培養皿來灌（guàn）注針頭，留下（xià）約0.5 mL的EDTA在注射器中。灌注時保持（chí）在培養皿上方，不要讓（ràng）無菌針頭的尖（jiān）端（duān）接觸培養皿，然後將注射器從針頭上移除，置於無菌區域內。重新裝上（shàng）針芯（xīn）和蓋子。注：在大型犬中，可以移除針頭防護（hù）裝置，以方便進（jìn）入髓腔。如圖1C。
圖1C：用EDTA溶液灌注穿刺針
4、觸摸並確定肱骨近端外側的平坦區域，位於大結節的遠端。確定肩胛骨和肱骨之間的（de）肩關節，以確保不會誤采到該區域。在平（píng）坦區域正上方的皮膚上切開一（yī）個小口。如圖1D。
圖1D：在肱骨近端外側的（de）平坦區域切開一個小口
5、牽（qiān）拉皮膚，將針頭“彈入”切口，確保針頭已穿透深（shēn）層皮下（xià）組織。重新確認肱骨近端（duān）外（wài）側（cè）的平坦區域，位於（yú）大結（jié）節的遠端。將針尖直接放在骨（gǔ）頭上，垂直於平麵。以順（shùn）時針和逆時針旋轉的方式適度施加壓力，直至針頭穿透近端骨皮質。穿透皮質後，減小角度，使針頭朝向肘部（bù），平行於髓腔。繼續扭轉，直到針完全嵌入骨內。如（rú）圖1E。
圖1E：穿刺針彈入切口
6、移除蓋子和針芯，並迅速連接含有EDTA的注射器。抽吸至可見紅骨髓（2 ~ 5 mL足夠），並將內容物排出到培養皿。如圖1F。
圖（tú）1F：將骨髓吸入裝有EDTA的注射器
7、骨（gǔ）髓包含在白色的針狀物中，表明穿刺成功。使用毛細管或帶有毛細管球或移液管球的巴斯德移液管取出並排出這些（xiē）顆（kē）粒（lì），用於（yú）血塗片製備（bèi）。每片至少需要1個針狀物；然而，建議每張載玻片至少有3 ~ 5個較大的針狀物，以進行充分評估。任何剩餘（yú）的骨髓內容物都（dōu）可以（yǐ）收集到EDTA管中，並與載玻片一起送（sòng）往實驗室。如圖1G。
圖1G：使用巴斯德（dé）吸管取（qǔ）出顆粒以製備血塗片
8、在動物恢複後給與鎮痛藥物，並根據（jù）需要繼（jì）續使用。
潛在的不良反應、緩（huǎn）解措施或治療方（fāng）法
1、采樣部位感染，但這種情況很少見（jiàn）
2、對軟組織如神經、肌肉（ròu）和關節（jiē）表麵（miàn）的創傷
3、采樣部位出（chū）血
4、術後疼痛
緩解措（cuò）施（shī）
○ 密切注意無菌技術（shù）
○ 仔細辨別解剖標誌，準備骨骼/骨標本以（yǐ）正確找到解剖標（biāo）誌，避免對周圍組織造（zào）成意外創傷
○ 對采樣部位施（shī）加直（zhí）接壓力，髓內出血不會引起大的問題（tí），因為血液會迅速被吸收
○ 術後疼痛通常是短暫（zàn）的，鎮痛藥用作鎮靜/麻醉的預藥通常是足夠的，但如果需要也可以在術後使用
小結
為了提高骨髓穿刺抽吸的（de）成功率和樣（yàng）本質量，必須製定全麵的標準（zhǔn）操作程（chéng）序（SOP），涵蓋動物準備、麻醉管（guǎn）理、穿刺操作及樣本處理等（děng）各個環節，並對實驗人員進行係統且廣泛的培訓（xùn）。此外，實驗研究人員應持續（xù）優化和改進技（jì）術，精細化操作流程，提升效率與（yǔ）準確性，從而為生物醫學研究提（tí）供高質量的樣本和可靠的數（shù）據支持。
