血生化檢測

血生化檢測是對實驗動物血液內離子、脂類、蛋白質和各種酶（méi）等物質濃度的檢測。這些檢測項目的變化一般都與特定器官的功能有關，對評估實驗動物健康狀態以及驗證實（shí）驗動物造模是否成功等，都具有重要指導意義。由於血生（shēng）化涉及項目（mù）較多，本號將分兩篇對其進行介紹。

絕大多數血（xuè）生化檢（jiǎn）測都可（kě）以用血清或肝（gān）素（sù）血漿樣本檢測，兩者的檢測結（jié）果會有差異，但（dàn）這種差異並無臨床（chuáng）意義。然而，對於需要（yào）長（zhǎng）期監測動物，相同指標應在（zài）監測周期內（nèi）選擇相同樣本進行檢測。樣本的保存和抗凝劑的使用均應根據（jù）不同的檢測項目進行選擇。此外，樣本采集的質量可直接影響檢測結果。

對於大多（duō）數血生化項目，樣本應在采集後及時檢測，如不能（néng）及（jí）時檢測（cè），3天內可4℃或冷凍（-20℃或（huò）更低溫度）保存；若保存時長超出3天，需冷凍（dòng）（-20℃或更低溫度（dù））保存，切（qiē）忌將樣本反（fǎn）複凍融後進行檢測。但一些生化項目低（dī）溫保存也會影響其活性（xìng），如乳酸脫（tuō）氫酶和穀草轉氨酶。

尿素、鉀、鈉離子避免使用含銨鹽類抗凝劑進行檢（jiǎn）測；穀丙（bǐng）轉氨酶、肌酸激（jī）酶和總蛋（dàn）白避免使用枸櫞酸鈉抗凝劑進行檢測。本（běn）文僅列出（chū）部分生化項的抗凝劑（jì）選擇，更多信息可參考WHO 2002年發（fā）布（bù）的《實驗室檢查中（zhōng）抗凝劑的（de）使（shǐ）用》。

齧齒動物尤其實驗大小鼠的血生化參考範圍，目前仍沒有建立標準參考。這與實驗大（dà）小鼠的品係眾多有關。已（yǐ）有文獻證明，不同品（pǐn）係的小鼠血（xuè）生化會有差異。並且血生（shēng）化的結果與動物的年齡和性別（bié）等（děng）因（yīn）素相關。另外（wài），由於不同機構使用的檢測方法不同，如幹式生化（huà）分析儀和濕式生（shēng）化分析儀，且（qiě）使用試劑盒品牌不同、試劑盒檢測原理不同等，均會導致結果不同。這些因素都導致了實驗大小鼠的血生化標準參考範圍無法建立，目前可查到的參考範圍，均應根據內部情況（kuàng）進行參考。

蛋白質與（yǔ）肝膽功（gōng）能檢測

1.   總蛋白（Total protein, TP）

血液等體液中的蛋白質種類眾多，但目前尚無一種常規檢測技術可以對體液（yè）中各種類型蛋白質總量進行準確測定。因此，臨床對體液中總（zǒng）蛋白質測定通常是假設所有的體液（yè）蛋白質均是單純蛋白質，且各種體液蛋白與（yǔ）化學試劑（jì）的反應（yīng）性均一致。基於以上兩個假設，目前測定總蛋白最常用的方法有雙縮脲法和紫（zǐ）外分光光度（dù）法。血清（qīng）中的總蛋白實際檢測的（de）是除纖維蛋白原以（yǐ）外的成分，因此用血漿測定總蛋白較（jiào）血清測定值偏高。

總蛋白的濃度主要反（fǎn）應肝髒合成功能和腎（shèn）髒病變造成蛋白質丟失情況，可以用來判斷（duàn）機體的水合狀態，脫水的動物總蛋白濃（nóng）度會（huì）相對升高（gāo），即高蛋白血（xuè）症。當（dāng）動物出現慢性肝（gān）髒疾病、骨髓瘤、自（zì）身免疫性疾病、慢性炎症和感染等，會導（dǎo）致（zhì）TP和球蛋（dàn）白（bái）同時升高。

過（guò）度（dù）水合動物總蛋白濃（nóng）度會相對降低，即低蛋白血症，此時動物可（kě）能會出（chū）現浮（fú）腫、胸腔或腹腔積液。TP和（hé）白蛋白同時降低常見於肝功能受損導致蛋白質合成（chéng）減少、營養不良、蛋白丟失過多、消耗增加等病理性因素。

2.   白（bái）蛋白（Albumin, ALB）

ALB由肝實質   細胞合成分泌，是血漿中（zhōng）含量最多的蛋白質，大部分動物的白蛋白占血漿蛋白的35%~50%。ALB是動物機體內重要的營養蛋白，參與維持內環境穩定（dìng），也是（shì）血漿（jiāng）中多種物質的主（zhǔ）要轉（zhuǎn）運（yùn）蛋白。當出現炎性疾病、漿細胞瘤、淋巴瘤、腎小（xiǎo）球腎炎、營養不良、過度（dù）水（shuǐ）合等，均會導致齧齒動物出現血清白蛋白的降低；ALB升高則多見於脫（tuō）水動（dòng）物。

3.   球蛋白（Globulin，GLB）

球蛋白可以分為α球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白，大多數α球蛋白和β球蛋白由肝髒合成，γ球蛋白由漿細胞合成。α球蛋白中比較重要的兩種蛋白質（zhì）分別是高密度脂蛋（dàn）白和（hé）極低密度脂蛋白；β球蛋白包括補體（C3、C4）、轉鐵蛋白和鐵蛋白；γ球蛋白（即免疫球蛋（dàn）白）包括IgG、IgD、IgE、IgA和IgM。

球（qiú）蛋白的濃度一般通過總蛋白與白蛋白的差值來進行（háng）計算。球蛋（dàn）白減少主要由於合成減少，如使用免疫抑製劑；球蛋白的增加多見（jiàn）於（yú）γ球蛋白，常見原因有慢性肝髒疾病、免疫性疾病、骨髓瘤等。

4.   白蛋白（bái）/球（qiú）蛋白（A/G）

白球比應結合蛋（dàn）白質指（zhǐ）標進行（háng）分析，不同種（zhǒng）類、品係、年齡、性別動（dòng）物的白球比都有差異，很多病理狀（zhuàng）態會改變白球比。當白蛋白和球蛋白均（jun1）變化（huà）時，如出血導致白蛋白和球蛋白丟失、脫水導致（zhì）球蛋白和白蛋白增加時，A/G比值將變（biàn）化不大或保持在正常範圍內；當其（qí）中一個數值發生變（biàn）化且占主導時，那麽A/G比值將發生異（yì）常，如免疫（yì）球蛋白（bái）的（de）產生導致A/G比值降低（dī）、免（miǎn）疫球蛋白（bái）缺乏導致A/G比值增高。在臨（lín）床上（shàng），ALB、TP、GLB和A/G比值應結（jié）合一起進行分析。

5.   穀丙轉氨酶（Alanine aminotransferase, ALT）

臨床上廣泛用來作為（wéi）肝細（xì）胞損傷指標，也是中間代謝的關（guān）鍵酶。ALT主要存在於肝髒，但也廣泛存在於腎髒（zāng）、心肌、骨骼肌、胰（yí）腺等組織中，這些組織出現損傷或壞（huài）死，也會導致血清ALT水平升高。由（yóu）於ALT主要存在於細胞質，釋放比較容易（yì），因（yīn）此ALT升高可出現在組織損傷早期。血液中ALT的水平與肝損傷的嚴重程度不呈現相關性，ALT通常會在肝損傷12h內升高（gāo），並在24~48h內達到峰（fēng）值，除非存在慢性肝損傷，一般（bān）情況下血清ALT水平會在幾周內（nèi）恢複正常。比較特殊的是，豚鼠中ALT活性較低，因此ALT不（bú）適合（hé）用來（lái）作為判斷其肝損傷的標誌物（wù）。

目前（qián）已發現在人類、大小鼠和狗中，ALT具有兩種亞型，分別為ALT1和ALT2，其中ALT1主要在（zài）腎髒、肝（gān）髒、脂肪和心組織中表達；而ALT2主要（yào）在肌肉和脂肪中（zhōng）表達。在小鼠中，ALT2被認為是脂肪（fáng）變性的標誌物。ALT亞型的區分可以更精準反應器官損傷情況，但目前（qián）ALT分（fèn）型的檢測（cè）尚未廣泛應（yīng）用在實驗動物檢測中。

6.   穀草轉氨酶（Aspartate aminotransferase, AST）

AST主要存（cún）在於肝細胞內，在正常大鼠血清（qīng）中，細胞質中的AST約占總AST活性82%，線（xiàn）粒體膜上的AST約占總AST活性18%。此外，AST也存在於其他組織中（zhōng），如心髒、骨骼肌、腎髒、胰腺等，這（zhè）些組織損傷或壞（huài）死時，血清中AST也會升高。AST水（shuǐ）平升高表示（shì）非特異性肝髒損傷，齧齒動物在應激狀態或肌內注（zhù）射也可能導致AST升高，AST升高應先檢查血清或血漿樣本是否溶血，結合肌酸激酶（méi）水平，排除是否為（wéi）肌肉損傷導致AST升高，上述原因排除後，方可（kě）考慮為肝損傷導致AST升高。

7.   堿性磷酸酶（méi）（Alkaline phosphatase, ALP）

ALP是（shì）一組在酸性條件下水解磷酸單酯類化合（hé）物的酶，在許（xǔ）多組織中存在其同工酶，尤其是（shì）肝（gān）膽係統、骨（gǔ）骼內的成骨細胞、軟骨（gǔ）內的成軟骨細胞、腸道細胞。ALP水平（píng）與齧齒類動物的年齡及性別具有（yǒu）相關性，處於生長期的未成年（nián）動物ALP水平較高，隨著動物年齡的（de）增長，ALP水平（píng）明顯降低；且大多數雌性動物（wù）ALP水平（píng）低於雄性動物。而ALP的（de）病（bìng）理性升高則常見於發生肝（gān）膽疾病、骨骼疾病、惡性腫（zhǒng）瘤（liú）時的動（dòng）物（wù）。

8.   γ-穀氨酰轉移（yí）酶（Gamma-glutamyltransferase, GGT）

GGT存在於許多組織中，包括腎髒、胰腺、腸道和肌細胞。GGT升高多見於動物發生肝髒疾病、膽（dǎn）管阻塞以（yǐ）及急性胰腺炎（yán）等。需要注意（yì）的是，GGT在腎髒中濃度最高，但發生腎髒疾病時，GGT的增（zēng）加並不明顯，這是（shì）因為GGT會從受損的管狀上皮細胞中釋放到尿液中，而不是血液中。

9.   膽紅素（Bilirubin, Bil）

膽紅素是一（yī）種不（bú）可溶性分子，由脾髒內巨噬細胞降解血紅蛋白（bái）產生，是各種含血紅素蛋白中的血色素在一些係列酶作用下的降解產（chǎn）物，與脂類的消化吸收及黃疸形成具有（yǒu）重要（yào）關係。膽紅素在光照下分解，因此（cǐ），樣本應避光保存以保證結果準確性（xìng）。當動（dòng）物出現膽汁運輸障礙或腸（cháng）道吸收不良時，會導致膽紅素降低；當動物出現溶血性（xìng）疾病導致紅細胞（bāo）破壞或內出血（xuè）時，可使膽紅素含量增高。

10.  膽汁酸（Bile acids, TBA）

齧齒動物的膽汁酸（suān）代謝與人類（lèi）有（yǒu）所不同，大小鼠的膽汁酸以膽固醇（chún）為原料在肝細胞中合成，由肝源性分子（zǐ）組成，並主要與牛磺酸結合。膽汁酸可以促進脂類的消（xiāo）化吸收、調節膽（dǎn）固醇的代謝以及促進膽汁分（fèn）泌。當動物出現肝功（gōng）能受損、膽道阻（zǔ）塞等疾病時，均會導致膽汁酸水平增加。

腎髒功能檢測

1. 尿素（Urea）

尿素是哺乳動物蛋白質代謝的主要終末產物（wù），可自由濾過腎小球，當腎實質受損時，腎小球濾過率下（xià）降，血尿素濃度會升高，因此可以通過（guò）測定尿素水平來評估（gū）腎功能。需要注意的是，產尿酶菌（如金黃色葡萄球菌/變形杆（gǎn）菌屬/克雷伯菌屬）汙染的血液樣本可導致尿素（sù）分解，導（dǎo）致尿（niào）素水平下降，為避（bì）免這種情況，樣本采集後應及時進行檢測（cè），如不能及時檢測（cè），應將樣（yàng）本放置在冰箱冷藏中保存。另（lìng）外不同性（xìng）別及年齡（líng）差異，也會影響尿素水平（píng），隨著動物年齡增長，尿素水平會（huì）呈現下降（jiàng）趨（qū）勢（shì）。尿素（sù）的增加多見於高蛋白飲食、脫水（shuǐ）以及腎功能衰竭等（děng）。

2. 肌酐（Ceatinine, Crea）

血肌酐經腎小球濾過進入原尿，並（bìng）且不被腎小管（guǎn）重新吸收，機體內肌酐應保持恒定，因此測定血肌酐水平可以用來評估腎功能。但是和尿素一樣，肌酐不是腎（shèn）功能的準確指標，當腎功能損傷近75%時，方可引起血肌酐水平升高。肌酐降低則多見於動物營養不良、貧血等。

3. 尿酸（Uric acid, UA）

尿酸是（shì）嘌呤堿基代謝（xiè）產物，主要存在於肝髒中，小部分可經肝髒隨膽（dǎn）汁排泄。尿（niào）酸可自（zì）由濾過腎小球（qiú），也可腎（shèn）小管排泄。因此，排除外源性尿酸幹擾，血尿酸可反映腎小球（qiú）濾過功能和腎小管重吸收（shōu）功（gōng）能。當機體出現急性或慢性腎炎、多（duō）發性骨（gǔ）髓瘤等均會導致UA升高；肝髒壞死、肝功能（néng）衰竭等病理原因則會導致UA降低。